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大鼠肺動脈成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒【Rat Lung PrimacellTM：Normal Artery Fibroblasts】
     大鼠肺動脈成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒說明書大鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞分離自正常大鼠肺組織，呈單層多角形鋪路石狀分布。該細胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡，合成和分泌細胞因子和介質(zhì)，維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用。 雖然肺動脈組織機械韌性很強，但利用本公司試劑盒中提供的肺動脈組織分離體系來分離，EDTA/EGTA處理過的薄的肺動脈組織片能使得肺動脈組織中大鼠肺動脈成纖維細胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將大鼠肺動脈成纖維細胞分離開來。

本試劑盒適用于分離培養(yǎng)新生兒或成年人的大鼠肺動脈成纖維細胞。本體系提供了佳的組織分離條件，分離單個細胞的效率是已出版文獻中所報道的5~6倍。此外，本體系還能保證所分離的細胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。 大鼠肺動脈成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒適合于培養(yǎng)人的大鼠肺動脈成纖維細胞組織細胞。本試劑盒包含： （）OptiTDSTM大鼠肺動脈成纖維細胞組織解離液（3×ml） （2）大鼠肺動脈成纖維細胞組織處理緩沖液（00ml） （3）大鼠肺動脈成纖維細胞組織洗液（ml（500x）） （4）大鼠肺動脈成纖維細胞生長因子（ml 500x）及血清（5x0ml） （5）大鼠肺動脈成纖維細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（5 x00ml） （6）大鼠肺動脈成纖維細胞組織預(yù)備液（ x00 ml） （7）大鼠肺動脈成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒使用說明書
培養(yǎng)步驟：
大鼠肺動脈成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒說明書對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

小鼠真皮成纖維細胞*培養(yǎng)基00mL

熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes

人髂動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基00mL

葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum

植物桿菌 Lactobacillus plantarum

Calu-6(人肺退行性細胞)5×06cells/瓶×2

酒假絲酵母 Candida kefyr

豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum

MG-63(人骨肉瘤細胞)5×06cells/瓶×2

大鼠肺動脈成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒說明書3-溴吡分子式：58英文名稱：3- bromide：626-55-分子量： C5H4BrN

4-氯-3-硝三氟甲氧分子式：英文名稱：4- -3- nitro group three：4324535分子量：

,5-二硝萘分子式：28.7英文名稱：,5- two nitro naphthalene：605-7-0分子量： C0H6N2O4

鄰硝對甲砜甲分子式：25.23英文名稱：Ortho para nitro group for toluene：67-49-4分子量： C8H9NO4S

,2,3-三氯英文名稱：,2,3- three分子式：8.45分子量： C6H3Cl3：87-6-6

喹啉酸分子式：67.2英文名稱：Acid：89-00-9分子量： C7H5NO4

對三聯(lián)分子式：230.3英文名稱：To three：92-94-4分子量： C8H4

7-硝喹啉分子式：74.6英文名稱：7- nitro group：63-5-4分子量： C9H6N2O2

3,5-二氯溴分子式：225.9英文名稱：Two - 3,5- chloride：9752-55-7分子量： C6H3BrCl2；BrC6H3Cl2

堿性藍G英文名稱：Alkaline blue G分子式：分子量：：

注意事項：
. 接收到大鼠肺動脈成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒說明書，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。