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小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書

小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書

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小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書 詳細資料

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細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書
形態(tài)特性 母細胞樣

生長特性 半貼壁生長

特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。

培養(yǎng)條件 RPMI 640 (w/o Hepes) 0%FBS

傳代方法 :3傳代,3-4天傳次

傳代情況 C5

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 陰性

STR

同工酶

染色體

主要功能:
()小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達鈣通道及ICAM-和VCAM-,參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
(3)與血管疾病的進展和穩(wěn)定有關(guān)。
 生理變化:
()主動脈硬化。
(2)主動脈瘤
(3)主動脈鈣化。
基本特性:
()小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書組織來源于正常大鼠大動脈組織。
(2)鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
(3)原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細胞數(shù):>5×05 cells/ml。
(5)肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。
(6)不含有HIV-、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

運輸和保存:
小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
)mL凍存細胞懸液裝于.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存?zhèn)€月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
具體操作:
.預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
2.用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。
3.正確擺放使用的器械:保證足夠的*作空間,不僅便于*作而且可減少污染。
4.點燃酒精燈:注意火焰不能太小。
5.準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶,放入微波爐內(nèi)高火,8分鐘再次消毒。
6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液:大鼠主動脈平滑肌細胞取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。
7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細胞:注意取出細胞時要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,再在鏡下觀察細胞。
8.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時要在酒精燈上燒口消毒。?

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小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書phospho-CstF64(Ser83)  磷酸化細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 規(guī)格: 0.ml

RAB7  RAS基因相關(guān)蛋白RAB7抗體 規(guī)格: 0.ml

FSTL/FRP  卵泡相關(guān)蛋白 規(guī)格: 0.ml

MBP  髓鞘堿性蛋白(磷脂堿性蛋白)抗體 規(guī)格: 0.ml

Collagen II/Chondrocalcin  Ⅱ型膠原α蛋白/軟骨鈣素抗體 規(guī)格: 0.ml

PGAM/PGAM2  磷酸變位酶抗體 規(guī)格: 0.ml

Nox4/NADH  NADPH氧化酶4抗體 規(guī)格: 0.mlNF-L/Neurofilament L/Neurofilament 68  低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-RasGRF(Ser96)  磷酸化Ras特異性核苷酸釋放因子 規(guī)格: 0.ml

Rabbit Anti-mouse IgM/Cy3  Cy3標記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.ml

Mitochondrial ribosomal protein L  線粒體核糖體蛋白L抗體 規(guī)格: 0.2ml

HMBS/PBGD  卟膽原脫氨酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

操作流程:
小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V說明書主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-43),co2孵箱(日本yamato it-6)。
.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
.2. 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~0倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以×05/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%消化~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用0×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×04。
.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生的細胞,以0.25%消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于2個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×00%,計算貼壁率。 
.6 生長曲線 取指數(shù)生的細胞用消化制成單細胞懸液,以×04/孔接種于24孔板,每孔加入ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)0d,繪制細胞生長曲線

 

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