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大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng)

大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng)

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大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng) 詳細資料

注意事項:
. 接收到大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng),肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 

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大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng)

Rat Brain: Normal Meningeal Cells Derivatives

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大鼠腦膜細胞提取物【Rat Brain: Normal Meningeal Cells Derivatives】
     大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng)大鼠腦膜細胞提取物是從大鼠原代腦膜細胞提取的,大鼠原代腦膜細胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA*鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mgRNA68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證產品的質量。        蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。        潛在的應用: <>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。

兔抗A (Phospho-Ser726) 多克隆抗體 英文名:Anti-A (Phospho-Ser726) rabbit

兔抗EGFR (Phospho-Thr678)多克隆抗體 英文名:Anti-EGFR (Phospho-Thr678) rabbit polyclonal

兔抗EGFR (Phospho-Thr693) 多克隆抗體 英文名:Anti-EGFR (Phospho-Thr693) rabbit

兔抗APP (Phospho-668)多克隆抗體 英文名:Anti-APP (Phospho-668) rabbit polyclonal

兔抗HAC2 (Phospho-Ser394)多克隆抗體 英文名:Anti-HAC2 (Phospho-Ser394) rabbit polyclonal

兔抗HAC5 (Phospho-Ser498)多克隆抗體 英文名:Anti-HAC5 (Phospho-Ser498) rabbit polyclonal

兔抗HSP90AB (Phospho-Ser254)多克隆抗體 英文名:Anti-HHSP90B (Phospho-Ser254) rabbit polyclonal

兔抗SMCA (Phospho-Ser957)多克隆抗體 英文名:Anti-SMCA (Phospho-Ser957) rabbit polyclonal

兔抗BCR (Phospho-Tyr77)多克隆抗體 英文名:Anti-BCR (Phospho-Tyr77) rabbit polyclonal

兔抗PXN (Phospho-Tyr3)多克隆抗體 英文名:Anti-PXN (Phospho-Tyr3) rabbit polyclonal

兔抗EZR (Phospho-Thr567)多克隆抗體 英文名:Anti-EZR (Phospho-Thr567) rabbit polyclonal

兔抗RAF (Phospho-Ser338)多克隆抗體 英文名:Anti-RAF (Phospho-Ser338) rabbit polyclonal

大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng)000ul盒裝無菌吸頭,50盒/箱 00支  盒

兔抗Dig-HRP 0.ML  支

Uridine 尿苷 58-96-8  20mg

Kanamycin 硫酸 5g  瓶

X/gal(20mg/ml) ml  瓶

50ml有機離心管管架 8孔  個

兔抗雞IgG(免疫血清) 0.5ml  支

α-Linolenic acid α-亞麻酸 463-40-  20mg

Nacl-Peptone Buffer(pH7.0) PH7.0化鈉-蛋白胨緩沖液 250g  瓶

Securinine 一葉萩堿 560-40-2  20mg

Erythromycin 5g  瓶

培養(yǎng)步驟:
大鼠腦膜細胞提取物培養(yǎng)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按:2到:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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