當(dāng)前位置：使用Elisa試劑盒進(jìn)行檢測需全面質(zhì)量控制
點(diǎn)擊次數(shù)：1093 更新時間：2022-01-14
Elisa試劑盒因其操作簡單，靈敏度高，特異性好，經(jīng)濟(jì)安全等特點(diǎn)而在臨床上廣泛應(yīng)用，但是由于其操作步驟復(fù)雜，一般包括試劑準(zhǔn)備，樣本收集，加樣，溫育，洗滌，顯色，比色，結(jié)果判定等，其中任何一項(xiàng)操作不當(dāng)都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此，必須加強(qiáng)ELISA檢測的全面質(zhì)量控制，保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。
1.試劑
好的試劑是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的基礎(chǔ)。從4℃冰箱取出的試劑必須放置室溫20～30 min 后再啟用，否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質(zhì)分子的均勻分布。未用完的試劑和質(zhì)控品應(yīng)密封并及時放回冰箱保存。根據(jù)蛋白質(zhì)在冷凍過程中出現(xiàn)蛋白分子分布改變的特點(diǎn)，試劑正式啟用前應(yīng)充分混勻。所用蒸餾水、去離子水和自行配制的緩沖液等，都必須調(diào)整其pH 值和離子強(qiáng)度等。不同批次的試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件，嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免試劑批號改變而重建質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性。
2.標(biāo)本
患者標(biāo)本中有可能含有干擾試驗(yàn)的免疫物質(zhì)，導(dǎo)致假陽性或假陰性的結(jié)果，干擾因素一般可分為兩類，即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素一般包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等，避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合適的試劑；外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長及標(biāo)本凝固等。要注意避免標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血，標(biāo)本中血紅蛋白中含有血紅素基因，其具有類過氧化物的活性，因此，在以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)記的ELISA測定試驗(yàn)中，容易在溫育過程中吸附于固相，從而與加入的底物反應(yīng)顯色。標(biāo)本在低溫下保存時間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底加深，甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常血清標(biāo)本可在2～8℃保存1 周，冷凍保存時間會更長。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心，否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融，標(biāo)本的反復(fù)凍融會因其所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，使抗體效價下降從而引起假陰性結(jié)果。標(biāo)本的采集及分離要注意盡量避免細(xì)菌的污染。此外，標(biāo)本在凍存時會因蛋白質(zhì)局部濃縮分布不均，因此重新溶解的標(biāo)本必須混勻，但不要劇烈振蕩和反復(fù)顛倒。
