當前位置：還原型（GSH）樣本的前處理
點擊次數(shù)：1772 更新時間：2021-07-07
還原型（GSH）樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
① 準確稱取0.g組織或收集500萬細胞，加入mL試劑一和0uL試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿 600g，4℃離心5min。
③ 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，00g，4℃離心0min。
④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的 NOX（此步可選做）。
⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔0秒，重復(fù)30次），用于NOX活性測定。
血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至600nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（）試劑四于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入0μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五，混勻，記錄600nm處20s時吸光值A(chǔ)和min20s后的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A-A2。
NOX 活力單位的計算
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
、血清（漿）NOX活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個酶活力單位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反總÷V樣÷0.0÷T=2500×ΔA
2、組織、細菌或細胞中NOX活力的計算:
（）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變
Bis-Acrylamide 25g/00g Amresco 072
（甲叉雙丙烯酰銨）
BisBenzimideHoechstNo.33258 25mg/00mg/500mg Sigma B-2883
（熒光染料）
BisBenzimideHoechstNo.33342 25mg/00mg/500mg Sigma B226
（熒光染料）
Bis-Tris 25g/00g/kg原裝 Amresco 075
Bis-TrisPropane 5g/25g/500g原裝 Sigma B6755
Bluo-Gal 00mg原裝/g原裝 INALCO758-0750
(5-Bromo-3-Indolyl-β-D-
Galactopyranoside)
BM-Cyclin 37.5mg原裝 Roche 799050
（支原體抑制劑）
Boricacid 250g/500g/kg Amresco 0588
（硼酸）
BrainHeartInfusion 00g原裝/500g原裝 BD
（腦心浸液
(無瓊脂)）
BrainHeartInfusionAgar 00g原裝 BD 2065
（腦心浸液瓊脂）
BrainHeartInfusionAgar 500g原裝 BD 24820
（腦心浸液瓊脂）
BrainInfusionPower kg 國產(chǎn)
（腦浸粉）
