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技術(shù)文章

Hcy Elisa試劑盒利用植物細(xì)胞培養(yǎng)次生代謝產(chǎn)物
點(diǎn)擊次數(shù):1155 更新時間:2017-07-25

Hcy Elisa試劑盒對植物中含有大量有用的次生代謝物質(zhì)可以為人類提供藥品、色素、調(diào)味品、香料、殺蟲劑等。僅就藥物而言,約75%的人口依靠植物來防病治病。歐洲也約有/4的處方藥來自植物。迅速興起的植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)是保存和發(fā)展中藥材的一種可能途徑。使用細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)可以在可控的和可重復(fù)的條件下天然藥物,而不會受到病蟲害、地理、氣候季節(jié)等因素的影響,并且產(chǎn)物分離、提取操作簡單。科學(xué)家們在植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)有用天然產(chǎn)物方面已做出了大量的工作,但是由于植物細(xì)胞生長緩慢,有效成分含量低,遺傳穩(wěn)定性差和對剪切力敏感等許多問題的存在,使得目前植物細(xì)胞培養(yǎng)天然藥物的工業(yè)化仍受到一定的限制。

因此,如能解決以上問題實(shí)現(xiàn)工業(yè)放大,利用植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中藥藥用成分將大有可為。現(xiàn)在植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)已經(jīng)能夠進(jìn)行小規(guī)模的,而且些藥用植物種類都已接近工業(yè)化,如從日本黃連細(xì)胞培養(yǎng)物中黃連堿、從人參根細(xì)胞中人參皂苦等;相當(dāng)種類的藥用植物細(xì)胞大量培養(yǎng)已達(dá)到中試水平如長春花吲哚堿、丹參丹參酮、青蒿青蒿素、紅豆杉、紫草萘醒、三七皂昔等。自從99年Christen等人申請了有關(guān)紅豆杉組織培養(yǎng)的*個以來,*已有數(shù)十家實(shí)驗室正在進(jìn)行 0個紅豆杉屬組織培養(yǎng)的研究。近年來含量已提高了00多倍,達(dá)到53 mg/L,已開始進(jìn)行工業(yè)化。

通過篩選高產(chǎn)細(xì)胞系、改進(jìn)培養(yǎng)條件和技術(shù),以及設(shè)計適合植物細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)酵罐,人們已對包括紫草、長春花、毛地黃、黃連等在內(nèi)的多種藥用植物細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模實(shí)驗,有的已成商品投入市場。為了加速植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)商業(yè)化進(jìn)程,各國科學(xué)家們一方面不斷改進(jìn)培養(yǎng)技術(shù),如控制培養(yǎng)的氣相環(huán)境,加入刺激劑,加入大孔樹脂吸附劑等;一方面發(fā)展新的培養(yǎng)方法,如高密度培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)和固定化養(yǎng)等以期得到一種適會于植物細(xì)胞工業(yè)的培養(yǎng)方法。隨著研究的不斷發(fā)展,植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)成為一種成熟的工業(yè)化方式已經(jīng)為期不遠(yuǎn)了。同時,代謝產(chǎn)物生物合成的基礎(chǔ)研究越來越受到重視,特別是有關(guān)酶的確定和分離,不僅為控制代謝途徑提供了科學(xué)依據(jù),而且為利用基因工程手段操縱代謝途徑打下了重要基礎(chǔ)。

2. 利用發(fā)根農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化獲得毛狀糧次生代謝產(chǎn)物

由發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)感染雙子葉植物形成的毛狀根,在zui近十年已發(fā)展成繼細(xì)胞培養(yǎng)后又一新的培養(yǎng)系統(tǒng)。毛狀根生長迅速,遺傳性穩(wěn)定和生化特性不易改變的特性,越來越受到人們的重視。這一培養(yǎng)系統(tǒng)對傳統(tǒng)藥材來講更為重要。因為約三分之一的傳統(tǒng)藥材是植物的根部。目前已在長春花、煙草、紫草、人參、曼陀羅、顛茄、丹參、黃花、甘草和青蒿等四十多種植物中建立了毛狀根培養(yǎng)系統(tǒng)。

Hcy Elisa試劑盒毛狀根大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的主要問題之一是物質(zhì)轉(zhuǎn)移。由于培養(yǎng)對象是相互連結(jié)的非均勻物質(zhì),因此流體力學(xué)性質(zhì)明顯不同于懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。大規(guī)模培養(yǎng)使用的發(fā)酵罐有多種類型,其中以氣升式效果為佳。在提高毛狀根中次生物質(zhì)數(shù)量的研究中,發(fā)展了培養(yǎng)基連續(xù)流動、雙液相發(fā)酵等新的培養(yǎng)技術(shù);利用大孔樹脂做為吸附劑的培養(yǎng)方法也有報道。

3. 次生代謝途徑的基因工程

傳統(tǒng)藥材合有的有效成分絕大部分是次生代謝產(chǎn)物,它們的合成途徑非常復(fù)雜,往往有幾個或十幾個酶參與,因而找出形成特定產(chǎn)物的關(guān)鍵酶就成為利用基因工程技術(shù)傳統(tǒng)藥材有效成分的關(guān)鍵步驟之一,而尋找關(guān)鍵酶的基因工程技術(shù)傳統(tǒng)材有效成分的關(guān)鍵步驟之一,而尋找關(guān)鍵酶的基因,選用合適的載體和在受體適當(dāng)部位表達(dá)的研究也是十分關(guān)鍵的內(nèi)容。Hashimoto等將天仙子胺6-β-羥基化酶基因通過Ri質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到富含天仙子胺的莨菪毛狀根中,與對照級相比,莨菪胺含量增加了五倍。

此外,利用植物作為一個生物反應(yīng)器而使外源基因表達(dá)的研究熱點(diǎn)正在興起,已有一些來自細(xì)菌、動物和人類的某些抗原、抗體和特異蛋白編碼的外源基因在轉(zhuǎn)基因的植物中得到表達(dá),如a一栝樓素、血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑、抗體、細(xì)菌和病毒的抗原、腦菲肽、表皮生長因子、促紅細(xì)胞生長素、生長激素、人血清蛋白、干擾素和水蛭素等。目前這些實(shí)驗大都以煙草作為受體植物進(jìn)行的,再加上表達(dá)效率較低,因而還很難表現(xiàn)出它們的應(yīng)用價值。隨著Hcy Elisa試劑盒表達(dá)效率的提高和受體植物范圍的不斷擴(kuò)大,必定會給傳統(tǒng)藥材加入新的遺傳特性的研究帶來新的動力。

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