當(dāng)前位置：PⅢNP Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
大鼠血栓素B2（TXB2）ELISA試劑盒本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠血栓素B2(TXB2)水平。用純化的大鼠血栓
素B2(TXB2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血栓素
B2(TXB2)，再與HRP 標(biāo)記的血栓素B2(TXB2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，
經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下
轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血栓素B2(TXB2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm
波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠血栓素B2(TXB2)濃度。
PⅢNP Elisa試劑盒操作步驟
. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：大鼠血栓素B2（TXB2）ELISA試劑盒本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
320 ng/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60 ng/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
80 ng/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40 ng/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 ng/L 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品50μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測(cè)樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
5 分鐘.
0. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
. PⅢNP Elisa試劑盒測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止
液后5 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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